PEMBUATAN PEREAKSI UNTUK PENGUJIAN BAKTERI Escherechia coli

Pereaksi  yang digunakan dalam pengujian bakteri Escherechhia coli yaitu Kovacs, Alpha naphtol, KOH 40%, Methyl red  untuk uji IMVIC dan reagen pewarnaan gram untuk uji morfologi. Langkah pembuatan pereaksi yang digunakan untuk uji bakteri Escherechia coli adalah sebagai berikut:

a.   Pereaksi Kovacs

     Siapkan p-Dimethylaminobenzaldehyde 5 g, amyl alcohol 75 ml, dan HCl (concentrate) 25 ml. Langkah pembuatannya yaitu larutkan p-Dimethylaminobenzaldehyde dalam amyl alcohol. Pelan-pelan tambahkan HCl. Simpan pada suhu 4 C. Untuk uji Indol tambahkan 0,2 ml - 0,3 ml ke dalam kultur bakteri dalam tryptone broth. Warna merah pada permukaan lapisan menunjukkan reaksi positif. Pereaksi  Kovac dapat dilihat pada Gambar 14.

                           Gambar 14. Pereaksi  Kovac (Balai KIPM Kelas II Semarang, 2017)

b.  Pereaksi Alpha Naphtol

     Siapkan naphtol 2,5 g dan ethanol 50 ml. Langkah pembuatannya yaitu timbang naphtol 2,5 g tambahkan ethanol 50 ml kemudian dihomogenkan. Pereaksi  Alpha naphtol dapat dilihat pada Gambar 15.

Gambar 15. Pereaksi  Alpha naphtol (Balai KIPM Kelas II Semarang, 2017)

c.   KOH 40%

     Siapkan KOH 40 g dan aquades 100 ml. Langkah pembuatannya yaitu timbang KOH 40 g tambahkan aquades 100 ml kemudian dihomogenkan. Pereaksi  KOH 40% dapat dilihat pada Gambar 16.

                   Gambar 16. Pereaksi  KOH 40% (Balai KIPM Kelas II Semarang, 2017)

d.  Pereaksi Methyl red

     Siapkan methyl red 0,01 g, alcohol 96% 20 ml dan aquades 30 ml. Langkah pembuatannya yaitu timbang methyl red 0,01 g tambahkan alcohol 96% 20 ml dan aquades 30 ml kemudian dihomogenkan. Pereaksi  Methyl red dapat dilihat pada Gambar 17.

Gambar 17. Pereaksi  Methyl red (Balai KIPM Kelas II Semarang, 2017)

e.   Reagen Pewarnaan Gram

·      Hucker’s  Crystal violet

Buat larutan A dengan cara meniimbang crystal violet  2 g tambahkan Ethyl alcohol 95% 20 ml kemudian dihomogenkan. Selanjutnya buat larutan B dengan cara menimbang ammonium oxalat 0,8 g  dan tambahkan aquades 80 ml kemudian dihomogenkan. Setelah itu campurkan larutan A dan B, simpan selama 24 jam dan saring menggunakan kertas saring.

·      Gram’s Iodine

Siapkan Iodine 1 g, Potassium Iodine 2 g, dan aquades 300 ml. Masukkan KJ dalam mortar,  tambahkan Iodine dan gerus dengan alat penggiling selama 5 detik-10 detik. Tmbahkan 1 ml air dan gerus kemudian tambahkan 5 ml. Tambahkan lagi 10 ml dan gerus. Tuang larutan ini dalam botol pereaksi. Bilas mortar dan alat penggilingnya dan tambahkan air hingga volume 300 ml.

·      Hucker’s counterstain (larutan stok)

Siapkan safranin O 2,5 g dan Ethanol 95%. Langkah pembuatan pereaksinya dengan melarutkan 10 ml larutan stok ke dalam 90 ml aquades.